体外释药取样操作全流程：2025 最新指南与注意事项

? 体外释药取样操作全流程：2025 最新指南与注意事项

? 一、2025 最新指南核心要点解读

• 膜材选择：建议对混合纤维素酯、尼龙等不同膜材及孔径进行筛选，确保膜与药物及接收介质相容。比如，在 IVRT 研究中，需提供每种膜的药物释放速率线性和精密度数据，避免因膜吸附导致药物损失。
• 接收介质：常用 pH5-7 的缓冲液 - 醇混合体系，药物在其中的溶解度应超过研究中最大浓度的 10 倍以上。例如，若接收介质中药物溶解度不足，可能导致释放曲线失真，影响结果判断。
• 取样时间点：IVRT 至少选取 5 个时间点，采样时长不少于 4 小时，且实际采样时间需控制在预定时间的 ±15 分钟或 ±2% 以内。比如，对于缓释制剂，可能需要每 30 分钟取样一次，以完整捕捉释放曲线。

• 设备确证：扩散池需测定孔口扩散面积、接收室容积、温度稳定性等参数。例如，搅拌速率偏差应控制在 ±10% 以内，确保接收介质充分混合。
• 精密度与重现性：批内和批间变异系数（CV）均应≤15%，建议进行至少三次独立试验。比如，在 IVPT 研究中，使用同一供体皮肤的相邻部位进行对比，可有效减少个体差异影响。
• 区分力验证：方法需能区分不同处方或工艺导致的释放速率差异。例如，通过对比参比制剂与高低规格受试制剂，若释放速率呈现预期差异，则说明方法具有良好的选择性。

? 二、操作全流程详解

• 设备检查：确保扩散池、溶出仪等设备清洁且校准合格。例如，扩散池的膜安装位置孔口扩散面积需精确测定，避免因设备误差影响结果。
• 介质准备：根据药物特性选择合适的接收介质，如 pH6.8 磷酸盐缓冲液，并进行脱气处理。例如，对于难溶性药物，可加入适量表面活性剂提高溶解度。
• 样品制备：准确称取制剂样品，如贴膏剂需裁剪至规定尺寸，确保上样量一致（±5%）。例如，甲硝唑凝胶的上样量控制在 0.37g 左右，以避免剂量耗竭。

• 装置安装：将膜材固定于扩散池，加入预热至 32℃±1℃的接收介质。例如，IVPT 研究中需使用离体人类皮肤，并在试验前后检测皮肤完整性。
• 上样与搅拌：将样品均匀涂布于膜表面，启动搅拌（通常 600rpm）。例如，贴膏剂需粘贴到人工膜上，并确保上样量在 2-15mg/cm² 范围内。
• 定时取样：按预设时间点取样，如 15、30、60 分钟等，每次取样后补充等量新鲜介质。例如，全自动取样系统可实现 16 个时间点的连续取样，减少人为误差。

• 过滤与保存：取样后立即过滤，去除杂质，滤液转移至标记好的容器中。例如，使用 0.45μm 滤膜过滤，避免纳米颗粒堵塞管路。
• 含量测定：采用 HPLC、紫外分光光度法等分析药物浓度。例如，盐酸普罗帕酮缓释片的体外释放度测定需使用高效液相色谱法，确保结果准确。
• 数据记录：详细记录取样时间、浓度等数据，绘制释放曲线。例如，将累积释放量与时间平方根作图，计算释放速率（斜率），并评估线性关系（r²≥0.97）。

⚠️ 三、关键注意事项

• 温湿度：IVRT 研究建议温度 21℃±2℃、湿度 50% RH±20%，IVPT 则需控制皮肤表面温度在 32℃±1℃。例如，温度波动可能影响药物扩散速率，导致释放曲线异常。
• 振动与噪音：避免设备附近有离心机、超声仪等振动源，防止影响搅拌均匀性。例如，沉重的脚步声或关门声可能干扰溶出仪的稳定性。

• 手动取样：需保持取样速度一致，避免因操作差异引入误差。例如，使用移液器时需垂直握持，确保取样体积准确。
• 自动取样系统：定期检查取样管线是否堵塞或磨损，如发现泵管老化需及时更换。例如，注射泵式取样系统可减少管路残留，提高精度。

• 清洁与校准：每次使用后彻底清洗扩散池、转篮等部件，防止药物残留。例如，桨叶若生锈或涂层剥落，可能改变流体动力学，影响溶出结果。
• 沉降篮选择：对于易漂浮的剂型，需使用沉降篮固定样品位置。例如，不同类型沉降篮可能影响释放速率，需在方法开发阶段进行验证。

? 四、常见问题与解决方案

• 现象：释放速率不稳定，或累积释放量未达预期。
• 原因：接收介质溶解度不足、膜材选择不当或搅拌速率异常。
• 解决：重新筛选接收介质，验证膜材相容性，检查搅拌设备校准情况。

• 现象：平行试验结果 RSD 超过 15%。
• 原因：上样量不均、取样技术不稳定或设备未校准。
• 解决：优化上样方式，使用自动取样系统，定期进行设备确证。

• 现象：IVPT 研究中皮肤屏障完整性测试不通过。
• 原因：皮肤储存条件不当或制备技术不规范。
• 解决：选择来自不同供体的皮肤，确保储存温度和时间符合要求，优化取皮厚度。

? 五、实际案例分析

? 六、不同释药方法对比

• 优点：操作简单，可使用标准溶出设备。
• 缺点：易因药物聚集或吸附导致误差，取样后需补充介质。

• 优点：避免反复取样损失，适合纳米药物。
• 缺点：透析膜可能吸附药物，影响真实释放速率测定。

• 优点：维持漏槽条件，结果更准确。
• 缺点：设备成本较高，操作较复杂。

? 七、设备选择建议

• 全自动系统：如 TDS-1012、RT800 等，适合高通量、高精度需求，可减少人为误差。
• 手动设备：适用于预算有限或小规模研究，但需严格控制操作流程。
• 注意兼容性：根据制剂类型选择设备，如贴膏剂宜用 Franz 扩散池第五法，半固体制剂可选用浸没池。

? 八、数据处理与报告撰写

• 释放曲线绘制：使用 Origin 等软件绘制累积释放量 - 时间曲线，标注线性方程和 r² 值。
• 等效性判定：IVRT 和 IVPT 研究需计算 90% 置信区间，若下限和上限均在 75%-133.33% 范围内则通过。
• 报告内容：包括方法开发、验证结果、实验数据、统计分析及结论，确保符合指导原则要求。